2.1 中药干预干细胞向神经细胞诱导分化 在体外特定的条件下，神经干细胞以悬浮成球或单层贴壁两种方式增殖，具有可以诱导分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞的潜能，为干细胞移植治疗脑血管病提供可能。神经干细胞的标志物包括巢蛋白、微管相关蛋白、胶质纤维酸性蛋白、p75神经营养R等。巢蛋白是中间纤维家族的成员，被列为第Ⅵ类中间纤维，其结构和分子量与其他的中间纤维成员有差异。巢蛋白基因的第二个内含子上有两个增强子，即中脑特异性增强子和中枢神经系统增强子。微管相关蛋白，神经元特殊形态的形成以及维持主要依赖于神经元细胞骨架中微管的装配，在此过程中，涉及到微管组成和动力学性质，最终形成稳定的微管结构，在神经元中，这一结构为沿着神经突运输物质提供了基础。胶质纤维酸性蛋白是脑内星形胶质细胞中间纤维的结构蛋白组成成分，最早从脑内星形胶质细胞中分离出来，并逐渐被人们看做成熟和反应性星形胶质细胞的特征性标记物，是全脑所有星形胶质细胞的特异性免疫组化标记物。 2.1.1 中药干预神经干细胞向神经细胞诱导分化 神经干细胞是一群能够自我更新并具有多种分化潜能的细胞，来源于神经组织并可生成神经组织，在适当条件下可分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。实验研究表明成年哺乳动物神经干细胞内仍然存在神经发生。目前，已明确的部位有海马齿状回、室管膜下区等[4-8]。神经干细胞移植物在宿主中枢神经系统内具有明显的生存、迁移和分化能力，由人胎脑分离的神经干细胞在植入胚胎或新生鼠脑内后，表现为在宿主脑内迁移并进行区域特异性分化，若将相同的人胎脑神经干细胞植入成年大鼠室管膜下区，神经干细胞沿吻侧迁移流迁移入嗅球，分化为双极神经元，其分化命运与存留于室管膜下区的内源性神经干细胞相同。从成年哺乳动物中枢神经系统分离的神经干细胞也具有较强的分化潜能，而决定神经干细胞分化命运的主要因素除局部微环境外，还包括神经干细胞的内在特性。 解俊领等[9]研究早期胚胎神经干细胞定向诱导分化为神经元，将细胞放在含有2%B27的DMEM/F12培养液中，经维甲酸在37 ℃、体积分数为5%的CO2常规培养条件下诱导分化5 d，通过免疫组织化学技术检测显示表达神经干细胞或前体细胞特异性标志蛋白巢蛋白以及神经元特异性标志蛋白β Ⅲ微管蛋白。崔猛等[10]观察黄芩苷促进神经干细胞体外向神经元分化，从孕十四五天的SD大鼠胚胎大脑皮质中分离神经干细胞，体外培养传代，选用第3代神经干细胞，培养6 d后细胞免疫荧光化学染色法观察微管相关蛋白2、胶质纤维酸性蛋白表达水平，培养2 h和6 d后检测转录激活子蛋白磷酸化水平，其结果见表1。"

  同时，黄芩苷还可以下调神经干细胞中转录激活子3蛋白磷酸化水平，白血病抑制因子+碱性成纤维细胞生长因子可以上调神经干细胞中转录激活子3蛋白磷酸化水平，黄芩苷可以抑制白血病抑制因子+碱性成纤维细胞生长因子引起的神经干细胞中转录激活子3蛋白磷酸化水平的上调。可见，黄芩苷可以诱导神经干细胞向神经元分化，并抑制其向星形胶质细胞分化。 2.1.2 中药干预骨髓间充质干细胞移植向神经细胞诱导分化 张全伟等[11]研究红景天苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化，选取第2代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，按照不同诱导剂分为维甲酸诱导组、红景天苷诱导组和对照组，通过不同时间点对细胞进行观察，发现诱导组细胞不同时间点神经干细胞标志物巢蛋白和神经细胞分化相关的兔抗微管蛋白和神经微管相关蛋白2表达阳性率均高于对照组，神经胶质纤维酸性蛋白阳性率维甲酸组显著高于红景天苷组。两组细胞均有神经细胞相关基因神经元特异性烯醇化酶、神经微管相关蛋白2 mRNA表达，与诱导时间有关，且不完全相同，两组间神经胶质纤维酸性蛋白mRNA的高峰度出现在诱导的早期，诱导后神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达随时间延长显著增加，兔抗微管蛋白表达出现于诱导早期，说明红景天苷促进骨髓间充质干细胞向神经细胞分化，其诱导效应与维甲酸相似，且向神经元样细胞定向分化方面优于维甲酸。 王莹等[12]观察黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响，将实验动物随机分为假手术组、模型组、骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞+黄芪组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型，骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞+黄芪组分别于建模成功后3 h经尾静脉注射已制备好的PKH26标记骨髓间充质干细胞悬液。另外，骨髓间充质干细胞+黄芪组于缺血前5 min、缺血后12，24 h腹腔注射黄芪皂甙Ⅳ。缺血再灌注72 h后检测各指标，结果见表2。"

  PKH26标记的骨髓间充质干细胞在海马有表达。与模型组比较，骨髓间充质干细胞组与骨髓间充质干细胞+黄芪组均能够使大鼠神经功能损害评分降低 (P < 0.01)，骨髓间充质干细胞+黄芪组神经功能恢复最为明显(P < 0.05)。模型组Bcl-2、Caspase-3、Bax蛋白表达以及细胞凋亡与假手术组差异有显著性意义(P < 0.01)。与模型组比较，骨髓间充质干细胞+黄芪组和骨髓间充质干细胞组均可下调Caspase-3、Bax蛋白表达和细胞凋亡指数(P < 0.05)，上调Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值(P < 0.05)，其中以骨髓间充质干细胞+黄芪组作用更为显著(P < 0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应显示，与模型组和骨髓间充质干细胞组比较，骨髓间充质干细胞+黄芪组能显著下调Caspase-3、Bax mRNA相对表达(P < 0.05)，上调Bcl-2 mRNA相对表达，差异有显著性意义(P < 0.05)。黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注神经元细胞凋亡有协同抑制作用，其作用机制可能与黄芪皂甙Ⅳ促进骨髓间充质干细胞抑制Box、caspase-3表达，增强Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值有关。 2.2 中药干预干细胞治疗脑血管病 脑为髓之海。诸髓者，皆属于脑。脑髓是由人体中最精微的物质“精”所组成，先天之精是脑髓得以生成的最根本的物质基础，肾精、水谷精微、气血津液是人之脑髓赖以继续生长发育、保持充满的物质基础，也是脑产生各种功能的物质基础[13]。中医范畴内的脑髓包括神经细胞、神经干细胞等，因此，从理论上讲有利于脑髓生成和生长的中药对神经细胞、神经干细胞的增殖分化是有利的，对神经干细胞治疗缺血性脑血管病会起到重要作用。 2.2.1 中药干预干细胞治疗脑缺血的实验研究 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血再灌注损伤后神经元突触重建：刘敬霞等[14]在体外全骨髓贴壁筛选培养法扩增骨髓间充质干细胞；线栓法制备脑缺血模型；大鼠脑缺血再灌注后24 h颈内动脉移植骨髓间充质干细胞。脑脉通由大黄、人参、川芎、葛根组成，具有益气活血、解毒降浊作用，可增强骨髓间充质干细胞移植后的脑保护作用，脑脉通灌胃给药。检测各组大鼠神经功能评分以及神经丝蛋白200、神经生长相关蛋白43和突触素表达的比较，见表3。 在表3可显示，与假手术组比较，各组神经功能评分均降低；脑脉通治疗组和脑脉通+骨髓间充质干细胞治疗组各时间点神经评分较模型组增高；脑脉通+骨髓间充质干细胞治疗组7，28 d组评分较骨髓间充质干细胞治疗组增高。模型各组神经丝蛋白200、神经生长相关蛋白43和突触素表达均较假手术组减弱；与模型组比较，脑脉通治疗组和骨髓间充质干细胞移植组28 d、脑脉通+骨髓间充质干细胞治疗组14，28 d大鼠神经丝蛋白200、神经生长相关蛋白43和突触素表达均明显增强；与骨髓间充质干细胞移植组比较，脑脉通+骨髓间充质干细胞治疗组14，28 d组的神经丝蛋白200和神经生长相关蛋白43表达均增强，28 d组突触素表达增强显著。脑缺血引起的神经元结构损伤随再灌注时间延长呈加重趋势，并使突触重塑功能减弱；骨髓间充质干细胞移植脑早期对神经功能修复作用不明显，脑脉通可使骨髓间充质干细胞移植后修复神经功能的作用提前并增强，其作用途径可能与增强突触重建相关生长蛋白水平，进而促进神经元突触重建相关。"